Классификация питательных сред. Дифференциально-диагностические среды, их состав и механизм действия Дифференциально диагностические среды микробиология
Функции ЦПМ.
1. защитная.
2. локализация ферментов ЦПЭ.
12. Бактериальный нуклеоид содержит:
2. полиамины.
13. У бактерий есть:
1. одна хромосома.
2. две хромосомы.
14. Бактериальная хромосома:
1. кольцевая.
2. фиксированная к ЦПМ.
15. Спорообразование у бактерий:
1. происходит во внешней среде.
2. служит для размножения.
16. Споры:
1. окрашиваются по Граму.
17. Значение капсулы:
1. защитное.
2. формообразующие.
18. Капсулы:
1. окрашиваются по Граму.
2. видны при окраске по Граму.
19. Капсулы защищают бактерии от:
1. антител
2. фагоцитоза.
20. Жгутики:
1. есть у всех бактерии.
2. всегда располагаются по все поверхности.
21. Жгутики состоят из:
1. белков.
2. углеводов.
22. Жгутики:
1. окрашиваются по Граму.
2. окрашиваются по Бури Гинсу.
23. Подвижность бактерий изучают:
1. посевом в полужидкий агар.
2. посевом на МПА.
24. Реснички(пили):
1. есть у всех бактерий.
2. функционально различны
25. Изучение совокупности большого числа признаков бактерий необходимо для:
1. геносистематики.
2. нумерической таксономии.
26. Конечная таксономическая еденица в бактериологии :
27. Основные морфологические формы бактерий:
2. извитые.
28. Компоненты ЛПС бактерии:
1. липид А.
2. полисахарид.
29. В состав пептидогликана входят:
1. тейхоевые кислоты.
2. N- ацетилглюкозамин и M- ацетилмурановая кислота.
30. Тинкториальные свойства бактерий характеризуют:
1. устойчивость во внешней среде.
2. чувствительность к фагам.
Сложные методы окраски..
1. окраска по Уилю-Нельсену.
2. окраска по Нейссеру.
Методы микроскопии для изучения строения внутренних структур бактериальных клетку.
1. фазово-контрастная.
2. электронная
33. Нуклеоид бактерии:
1. связан с ЛПС.
2. не имеет ядерной мембраны.
34. Для окраски спор у бактерий используют:
1. окраску по Бури- Гинсу.
2. окраска по Клейну.
35. Некультивируемые формы бактерий выявляют с помощью питательной среды:
36. Метаболизм бактерий:
1. не отличается от метаболизма жив. клеток.
2. более интенсивнее чем метаболизм жив. клеток.
37. Аэробный распад белка обозначается термином:
1. брожение.
2. тление.
38. Анаэробный распад белка обозначается термином:
1.окисление.
2. гниение.
39. СО 2 в качестве единственного источника углевода используют:
1. автотрофы.
2. паратрофы.
40. Органические источники углеводов используют:
1. гетеротрофы
2. автотрофы
41. Неорганические источники углеводов используют:
1. метатрофы.
2. ауксотрофы.
42. Зависимость бактерии от того или иного субстрата обозначается термином:
1. прототрофность.
2. гетеротрофность
43. Размножение бактерии происходит:
1. почкование.
2. осмосом.
44. Активный транспорт идет:
1. по градиенту концентрации.
45. Пассивный транспорт идет:
1. по градиенту концентрации.
2. против градиента концентрации.
46. ЦПЭ у бактерии локализована в:
1. клеточной стенке.
47. Простая питательная среда:
1. сахарный бульон.
48. Сложная питательная среда:
1. сахарный бульон.
49. Элективные питательные среды позволяют:
1. дифференцировать одни виды бактерии от других.
2. культивировать бактерии одного вида.
50. Дифференциально - диагностические среды позволяют:
1. культивировать бактерии со сложными питательными потребностями.
2. отличать один вид бактерии от других.
51. Требование, предъявляемое к питательным средам:
1. стерильность.
2. питательность.
52. Определение сахаролитической активности производят при посеве на:
2. среду Пешкова.
53. Простые питательные среды стерилизуют в:
1. термостате.
2. печи Пастера.
54. Среды с углеводами стерилизуют:
1. в печи Пастера.
2. в автоклаве при 0.5 атм.
55. Лабораторную посуду стерилизуют в:
1. термостате.
2. печи Пастера.
56. Оптимальная рН питательных сред для большинства патогенных бактерии:
Механизмы транспорта веществ в бактериальную клетку, которые проходят с затратой энергии.
1. пассивная диффузия.
2. активный транспорт.
Среды, применяемые для избирательного выделения чистой культуры бактерии
определенного вида из материалов, содержащих разнообразную микрофлору:
1. основные
2. дифференциально – диагностические.
Дифференциально- диагностические среды.
1. среда Гисса
60. Методы выделения чистых культур бактерий:
1. посев штрихом.
2. посев штрихом с обжигом петли.
61. Культуральные свойства бактерий:
1. внешний вид бактерий.
2. отношение к условиям культивирования.
62. Для определения протеолитической активности бактерии проводят следующие тесты:
1. на разжижение желатина.
2. на ферментацию глюкозы.
63. Этапы бактериологического исследования:
1. посев для выделения чистой культуры бактерий.
2. накопление чистой культуры бактерий.
64. Для определения вида бактерий необходимо изучение:
1. морфологических свойств
2. культуральных свойств.
65. Биохимические свойства бактерий- это:
1. способность бактерий расщеплять сложные питательные вещества.
2. способность расщеплять на синтетических питательных средах.
66. В состав нуклеоида входит:
2. полиамины.
67. Функцию регуляторных белков у бактерий выполняют:
1. гистоны.
2. полиамины.
68. Бактерий содержат:
1. гаплоидный набор хромосом.
2. диплоидный набор хромосом.
69. Бактериальная хромосома:
1. кольцевая.
2. свободно лежащая.
70. IS- последовательности:
1. обладают автономной репликацией.
2. несут структурные гены.
71. Подвижные генетические элементы:
1. IS- последовательности.
2. транспозоны.
72. Транспозоны:
73. Генетический материал бактерий содержится в:
1. хромосоме.
2. плазмидах.
74. Плазмиды содержат:
1. структурный ген
2. ген репликации
75. В бактериальной клетке:
2. несколько копий одной плазмиды.
76. Клетки сохраняют жизнеспособность при утрате:
1. плазмиды
2. хромосомы.
77. Клетки погибают при утрате:
1. плазмиды.
2. хромосомы.
78. Генотипическое выражение пола у бактерий связано с наличием:
1. Col- плазмиды.
2. Hey- плазмиды.
79. Штаммы с высокой донорской активностью называются:
1. Hfr- штаммы.
2. R- штаммы.
80. Модификации:
1. затрагивают генотип.
2. затрагивают фенотип.
81. Модификация – это проявление:
1. генотипической изменчивости.
2. фенотипической изменчивости.
82. Мутации:
1. затрагивают генотип.
2. затрагивают фенотип.
83. Генотипическая изменчивость:
1. мутации
2. модификации.
84. Механизм рекомбинации у бактерий:
1. транскрипция.
2. трансформация.
85. При рекомбинациях у бактерий:
1. образуется мерозигота.
2. меняется количество генетического материала.
86. Передача генетической информации умеренным фагом – это:
1. трансдукция.
2. трансформация
87. Популяция бактерий по тому или иному признаку:
1. гомогенная.
2. гетерогенная.
88. Изменение генотипа у бактерий может происходить:
1. по вертикали.
2. по горизонтали.
89. Генетические методы, используемые в диагностике:
1. ДНК- зондирование.
90. Цель ПУР диагностики:
1. выявление нуклеотидных последовательностей, кодирующих видовую принадлежности бактерий.
2. выявление нуклеотидных последовательностей, кодирующих основной фактор вирулентности данного вида микроорганизма.
91. Фаги – это:
1. вирусы бактерий.
2. токсины бактерий.
92. Свойства фага:
1. инфекционность.
2. фильтруемость.
93. Фаги содержат:
1. ДНК и РНК.
2. ДНК или РНК.
94. Для фагов характерен:
1. дизъюнктивный способ репродукций.
2. размножаются простым поперечным делением.
95. Фаги бывают:
1. умеренные.
2. вируальные.
96. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой может происходить по типу:
1. продуктивной инфекции.
2. абортивной инфекции.
97. Лизогенные клетки отличаются от нелизогенных по:
1. устойчивости к УФ излучению.
2. чувствительность к гомологичному фагу.
98. Методы выделения фагов:
1. фильтрование через бактериальные фильтры.
2. посев на питательные среды.
99. Фаги можно обнаружить по:
1. задержке роста индикаторной культуры.
2. образованию негативных колоний.
100. Фани применяют для:
1. лечения.
2. профилактики.
101. При продуктивной фаговой инфекций:
1. бактериальная клетка погибает.
2. фаг размножается.
102. Вирулентные фаги вызывают:
1. лизис клетки.
2. лизогенную конверсию.
103. Умеренные фаги вызывают :
1. лизис клетки.
2. лизогенизацию бактерий.
104. Лизогенные бактерий содержат:
1. профаг.
2. S – элементы.
105. Профаг – это:
1. интегрированное состояние фага.
2. свободное состояние фага.
106. Фаги по специфичности делят на:
1. видовые.
2. вирулентные.
107. Для фаготипирования бактерии используют фаги:
1. поливалентные.
2. видовые.
108. Фаготипирование проводят с целью:
1. эпидемиологического анализа.
2. подбора фагов для лечения.
109. Видовые фаги используются:
1. в ходе бактериологического исследования.
2. при постановке ПЦР.
110. Практическое использование фагов основано на:
1. их специфичности.
2. способности вызывать лизис бактерии.
111. Наличие фага в фильтрате определяют путем:
1. нанесение на газон индикаторной культуры.
2. посев на питательную среду.
112. Высокой бактериальной обсеменностью характеризуется:
1. толстый кишечник
2. тонки кишечник.
113 На видовой состав микрофлоры индивидуума влияет:
1. возраст.
2. экологическая ниша.
114. Функции нормальной микрофлоры:
1. витаминообразующая.
2. гормонообразующая.
115. Дисбактериоз- это:
1. качественное изменение нормальной микрофлоры.
2. количественное изменение нормальной микрофлоры.
116. Причины дисбактериоза:
1. лучевая болезнь.
2. тяжелые инфекции.
117.Показатели дисбактериоза:
1. появление патогенных бактерии.
2. появление или увеличение числа редко встречающихся в норме микроорганизмов.
118.Методы лабораторной диагностики дисбактериоза:
1. количественный бактериологический
2. серологический.
119.Принципы коррекции дисбактериоза:
1. симптоматическая терапия.
2. антибиотики.
120.Препараты для коррекции дисбактериоза кишечника:
1. бификол.
2. бифидумбактерии.
дифференциально-диагностические среды, специальные питательные среды, используемые для идентификации микроорганизмов, обладающих избирательной биохимической активностью по отношению к определённым веществам. В процессе развития микробы с помощью ферментов расщепляют входящие в состав среды определённые вещества, что устанавливают по изменению среды.
Ряд патогенных микроорганизмов разлагают углеводы, многоатомные спирты с образованием кислот и газов (углекислоты, водорода, метана), что указывает на принадлежность их к определённой группе или виду бактерий. Для установления этих свойств готовят жидкие или полужидкие Д.-д. с. с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннозой и др. углеводами, многоатомными спиртами (пёстрый ряд), с индикаторами (Андраде, Гисса), среды с молоком. Ферментативную способность микробов определяют по появлению газа или изменению цвета индикатора. Интенсивность кислотообразования из глюкозы определяют на среде Кларка, образования ацетилметилкарбонала - с помощью реакции Фогеса‑Проскауэра, амилолитическую способность микробов - на крахмальном агаре. Протеолитические свойства микробов определяют на средах, не содержащих глюкозу и глицерин, - мясо-пептонном желатине, свернувшейся лошадиной сыворотке, молочном агаре. Мясо-пептонный желатин засевают путём укола до дна пробирки, инкубируют при t 20-22{{°}}C, а затем определяют степень разжижения желатина. Гемолитическую способность микробов устанавливают путём высева на кровяной агар или бульон с кровью. Для определения редуцирующей активности микробов применяют Д.-д. с. с красителями (метиленовый синий, лакмус, индидокармин, тионин и др.). По мере роста микробов происходит полное или частичное обесцвечивание или изменение цвета красителя. Используют также среды с нитратами, в которых под воздействием ферментов определенных микробов нитраты восстанавливаются в нитриты и далее - в аммиак или свободный азот.
Существуют специальные селективные среды для выращивания анаэробов (Китта-Тароцци среда и др.), идентификации некоторых бактерий кишечной группы, сальмонелл (среды Эндо, Левина, Симмонса, Плоскирева и др.), для определения подвижности микробов, их отношения к кислороду (среда Пешкова) и др. Возбудителя туберкулёза выращивают на специальных яичных средах Петраньяни, Ливенштейна-Йенсена, Гельберга, возбудителей паратуберкулёза - на среде Дюбо-Смита, бруцеллёза - на средах Альбини, Вейбриджа, Корнеевой; возбудителя вибриоза - на среде ГНКИ. Микоплазмы наиболее успешно выделяются и поддерживаются на среде Эдварда и др. специальных средах; лептоспиры - на сывороточных средах Терских, Уленхута, Любашенко, альбуминовой среде ГНКИ. Возбудитель копытной гнили овец растет на мозговых средах с добавлением экстракта копытного рога и серусодержащих аминокислот; грибы - на средах Саоуро, Чапека и др.
Среда Штерна. Используют для дифференциации сальмонелл. К 1000 см 3 МПБ или бульона Хоттингера добавляют 2,5 см 3 10%-ного насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 16,6 см 3 10%-ного водного раствора натрия сульфита (Na 2 S0 4) и 10 см 3 глицерина. Разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при 112° С. Готовая среда имеет желтую окраску. Если испытуемая культура относится к S. typhimurium, которая способна ферментировать глицерин, то среда приобретает фиолетовый оттенок.
Среда Биттера. Используют для дифференциации сальмонелл. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 0,05 г пептона, 0,5 г натрия цитрата, 5 г натрия хлорида, 5 г рамнозы (или арабинозы). Кипятят на водяной бане 3-5 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112° С или текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Если испытуемая культура относится к сальмонеллам, способным ферментировать рамнозу или арабинозу (S. typhimurium), то при добавлении к суточной культуре (выращенной на данной среде) 2 капель 0,5%-ного спиртового раствора метилового красного среда приобретает красную окраску.
Среда для посева по Свену -Гарду. Используют для выявления у сальмонелл специфической фазы жгутикового антигена. К 1000 см 3 МПБ или бульона Хоттингера добавляют 8 г агара и растворяют путем кипячения на водяной бане. Устанавливают рН 7,2-7,4, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 121° С.
Среды с аминокислотами. Используют для определения способности энтеробактерий в анаэробных условиях расщеплять левовращающие аминокислоты - лизин, орнитин, аргинин. В 600 см 3 дистиллированной воды растворяют 5 г пептона и 1 г глюкозы, устанавливают рН 6,0-6,1. Приготовленный раствор разливают по 150 см 3 в четыре колбы. В каждую из трех колб вносят по 10 г одной из аминокислот. Четвертая колба остается в качестве контрольной. Содержимое всех колб кипятят на водяной бане 5-10 мин, устанавливают рН 6,0-6,1. Во все че тыре колбы вносят по 0,6 см 3 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезоло-вого пурпурного или бромтимолового синего и по 5 см 3 0,1%-ного спиртового раствора крезолового красного. Разливают в агглютинационные пробирки по 2-3 см 3 и стерилизуют 30 мин при 110° С.
Для проведения теста в пробирки, содержащие аминокислоту, и в контрольную пробирку засевают испытуемую культуру, после чего заливают стерильным вазелиновым маслом (слоем толщиной 10 мм) и инкубируют. Учет проводят в течение 4 сут. При положительной реакции среды с аминокислотами приобретают фиолетовую или синюю (в зависимости от индикатора) окраску, в контрольных пробирках среда имеет желтую окраску.
Состав 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезолового пурпурного: бромкрезоловый пурпурный - 1,6 г, спирт этиловый 96° - 100 см 3 .
Состав 0,1%-ного спиртового раствора крезолового красного: крезоловый красный - 0,1 г, спирт этиловый 96° - 100 см 3 .
Среды, содержащие органические кислоты. Используют для дифференциации сальмонелл по их способности расщеплять органические кислоты (тартраты, мукаты, натрия цитрат). В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, добавляют 8,5 см 3 0,1 Н раствора натрия гидроокиси, 12 см 3 0,25%-ного водного раствора бромтимолового синего, 10 г D-тартрата (или одну из следующих кислот: 5 г L-тартрата, 5 г мезотартрата, 10 г муката, 10 г натрия цитрата). Устанавливают рН 7,4, разливают в пробирки и стерилизуют 20 мин при 112° С. Готовая среда синезеленого цвета. При положительной реакции в процессе инкубации среда с культурой приобретает зелено-желтую окраску.
Для получения более четких результатов в конце срока инкубации в пробирки с сомнительной или отрицательной реакцией добавляют несколько капель насыщенного раствора ацетата свинца, в результате при отрицательной реакции выпадает обильный осадок (до 2 / 3 объема среды), при положительной - выпавший осадок незначителен.
Среда с триптофаном.
Используют для определения у бактерий наличия триптофандезаминазы. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 2 г DL-триптофана. Устанавливают рН 6,7-6,9. Для определения способности бактерий к дезаминированию триптофана испытуемую агаровую культуру бактериологической петлей вносят в пробирку с 0,5 см 3 раствора триптофана и инкубируют 30 мин при 37° С, после чего вносят
1 каплю 10%-ного водного раствора железа хлористого трехвалентного (FeCl 3). При положительной реакции среда приобретает темно-красную окраску, при отрицательной - желтую.
Среда с калием цианидом. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлорида, 0,225 г калия дигидрофосфата (КН 2 Р0 4), 5,64 г натрия гидрофосфата (Na,HP0 4). Устанавливают рН 7,6, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 112° С. После стерилизации быстро охлаждают. Среду этого состава используют в качестве контрольной. Непосредственно перед применением к 100 см 3 среды асептически добавляют 1,5 см 3 свежеприготовленного 0,5%-ного водного раствора калия цианида (KCN), разливают по пробиркам и закрывают корковыми пробками.
Пробу считают положительной, если через 24-48 ч после посева культуры в среде заметно помутнение или опалесценция. При отрицательном результате среда остается абсолютно прозрачной, в то время как в контрольной пробирке заметно помутнение.
Среда Клиглер. Используют для определения образования сероводорода. В 1000 см 3 МПБ растворяют при кипячении 20 г пептона, 5 г натрия хлорида, 0,4 г натрия сульфида, 0,08 г натрия тиосульфата, 20 г агара. Устанавливают рН 7,8, затем снова кипятят, фильтруют через бумажный фильтр и добавляют 0,5 г железа сернокислого, растворенного в небольшом количестве воды, 10 г лактозы, 1 г глюкозы и 12 см 3 0,2%-ного раствора фенолрота в 50%-ном спирте. Среду разливают по 6-7 см 3 в пробирки и стерилизуют 30 мин при 112° С. Среда имеет оранжево-красную окраску. При образовании сероводорода среда окрашивается в черный цвет.
Среда Кларка.
Используется для постановки реакции Фогес-Проскауэра и пробы с метиловым красным для определения окисления глюкозы с образованием 2-кетоглюконата. В 100 см 3 дистиллированной воды растворяют 0,5 г калия гидрофосфата (К 2 НР0 4), 0,7 г пептона, 0,5 г глюкозы. Кипятят 2-3 мин, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 6,9, разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при
111° С.
Реакцией Фогес-Проскауэра выявляют промежуточный продукт расщепления глюкозы - ацетилметилкарбинол (ацетоин). Для этого испытуемую культуру выращивают на среде Кларка 4-5 дней в 2 пробирках. Одну пробирку культивируют при 25° С, другую при 37° С. Из обеих пробирок по 1 см 3 культуры переносят в другие пробирки и добавляют 0,6 см 3 5%-ного спиртового раствора а-нафтола, смесь перемешивают. Затем добавляют 0,2 см 3 .40%-ного водного раствора КОН. Тщательно перемешивают и инкубируют 1 ч.
Учет реакции проводят через 15 и 60 мин. Положительная реакция - вишневое окрашивание среды.
Тестом с метиловым красным устанавливают снижение рН среды при расщеплении глюкозы до 4,4-6,0. Раствор метилового красного готовят добавлением к 0,1 г метилрота 300 см 3 95%-ного этанола. После растворения красителя добавляют 200 см 3 дистиллированной воды.
Для постановки теста в пробирку с 5 см 3 среды Кларка вносят петлю испытуемой культуры и инкубируют 2-5 сут при 25° С. Затем добавляют 5-6 капель реактива метиловый красный и следят за изменением окраски. При положительном результате (рН 4,0-6,0) среда приобретает красный цвет. При отрицательном результате (рН 6,0-7,0) среда приобретает желтый цвет.
Среда с мочевиной по Кристенсену. Используют для определения способности бактерий к гидролизу мочевины (уреазная активность) с образованием аммиака и углекислоты. В 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 1 г пептона, 5 г натрия хлорида, 2 г калия дигидрофосфата (КН 2 Р0 4), 20 г агара. Смесь стерилизуют 20 мин при 115° С. Затем вносят 1 г глюкозы и 6 см 3 0,2%-ного раствора фенилрота, стерилизуют текучим паром 1 ч, охлаждают до 50° С и асептически добавляют 100 см 3 20%-ного водного раствора мочевины, стерилизованного фильтрацией. Среду разливают по пробиркам и скашивают.
Испытуемую культуру засевают на поверхность скошенного агара и культивируют 1-4 сут. Положительный результат (защелачивание среды) - красно-малиновое окрашивание среды.
Среда Симмонса. Используют для определения способности бактерий утилизировать цитрат как единственный источник углерода. Состав: агар - 20 г, NaCl - 5 г, MgS0 4 х 7Н 2 0 - 0,2 г, К 2 НР0 4 - 1 г, NH 4 х Н 2 Р0 4 - 1 г, C 6 H 5 0 ? Na 3 х 5Н 2 0 - 3 г, бромтимоловый синий - 0,08 г, вода дистиллированная - 1000 см 3 .
В дистиллированной воде растворяют агар. Соли растворяют отдельно в небольшом объеме воды и затем смешивают с агаром, до объема 1000 см 3 . Устанавливают рН 7,2, добавляют 40 см 3 0,2%-ного водного раствора бромтимолового синего. Среду перемешивают, разливают в пробирки по 5-7 см 3 и стерилизуют 15 мин при 121° С. После автоклавирования агар скашивают.
Испытуемую культуру засевают на поверхность агара и инкубируют. При положительном результате отмечают рост культуры на среде и изменение ее цвета с оливкового на синий.
Среда с алгинатом натрия. Используют для определения способности бактерий утилизировать натрия алгинат как единственный источник углерода. Состав среды аналогичен составу среды Симмонса, но вместо натрия цитрата вносится 2,5 г натрия алгината. Положительным считают изменение цвета среды. Микроорганизмы, не обладающие способностью усваивать натрия алгинат, на данной среде не растут.
Среды Гисса. Используют для изучения способности ферментации углеводов с образованием кислоты и газов. Состав: пептон - 10 г, натрия хлорид - 5 г, вода дистиллированная - 1000 см 3 , 0,1%-ный индикатор Андреде, углевод 0,5% (адонит, глицерин, сорбит, дульцит, целлобиоза, раффиноза, трегалоза, салицин, арабиноза, мальтоза, рамноза, ксилоза) или 1,0% (глюкоза, лактоза, маннит, сахароза).
В дистиллированной воде растворяют навески пептона, натрия хлорида, добавляют индикатор, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,1-7,2 и стерилизуют 15 мин при 111 ° С. Затем добавляют углевод. Приготовленную среду разливают по пробиркам и стерилизуют
15 мин при 110° С.
Среда для выявления фенилаланиндезаминазы. Состав: сухой дрожжевой экстракт-3 г, натрий хлористый - 5 г, L-фенилалапин - 1 г, Na 2 HP0 4 - 1 г, агар - 12 г, вода дистиллированная - 1000 см 3 . Смешивают воду и дрожжевой экстракт, нагревают, добавляют компоненты и кипятят до расплавления агара, рН среды 7,0-7,2. Горячую среду фильтруют, разливают в пробирки по 2-3 см 3 и стерилизуют 30 мин при 112° С. Среду скашивают.
Испытуемую культуру засевают штрихом по поверхности агара и через сутки инкубации добавляют на поверхность культуры несколько капель 10%-ного водного раствора железа хлорида (FeCl 3). При дезаминировании фенилаланина среда окрашивается в зеленый цвет, при отрицательном результате сохраняется желтое окрашивание.
Среда для выявления β-галактозидазы. В 100 см 3 расплавленного и охлажденного до 40-45° С МПА асептически добавляют 20 см 3 1%-ного водного раствора О-нитрофенил-β-D-галактопиранозид. Среду разливают по пробиркам.
Испытуемую культуру засевают уколом петлей до дна пробирки. Посевы инкубируют 24 ч при 37° С.
При положительной реакции среда окрашивается в желтый цвет одним из конечных продуктов гидролиза О-нитрофенил-β-D-галактопиранозида О-нитрофенолом.
Среды для выявления лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы и чргининдегидролазы. Состав: мясная вода - 400 см 3 , пептон - 5 г, глюкоза - 1 г, вода дистиллированная - 600 см 3 , 0,1%-ный спиртовой раствор крезолового красного - 5 см 3 , 1,6%-ный спиртовой раствор бромкрезолового пурпурного - 0,6 см 3 , L-лизин (или орнитин, или аргинин) -10 г.
Мясную воду, пептон, глюкозу и дистиллированную воду смешивают, устанавливают рН 6,0-6,1. Вносят аминокислоту, кипятят 8-10 мин, добавляют индикатор и разливают в агглютинационные пробирки по
3 см 3 . Стерилизуют 30 мин при 110° С. Цвет среды розовый.
Испытуемую культуру засевают в среды с аминокислотами (опыт) и среду безаминокислоты (контроль). Во все пробирки вносят стерильное вазелиновое иасло до получения слоя в 4-5 мм. Пробирки инкубируют 4 дня при 37° С.
При положительной реакции (защелачивание среды) наблюдается синee окрашивание в опытных пробирках и желтое - в контрольной.
Среда для определения пиразинамидазной активности у Y.enterocolitica . Состав: трипсинизированный соевый агар - 30 г, дрожжевой экстракт сухой - 3 г, пиразинкарбоксиамид - 1 г, трисмалат буфер 0,2 М, рН 6,0-1000 см 3 .
Составные части среды смешивают и подогревают на водяной бане до их растворения. Разливают по 5 см 3 в пробирки, стерилизуют 30 мин при 112° С и скашивают.
Среда для определения калъцийзависимости роста у Y. Enterocolitica . В качестве питательной основы используют коммерческую среду для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (агар АГВ).
К стерильному расплавленному и охлажденному до 50° С агару добавляют (из расчета на 100 см 3) 8 см 3 0,25 М стерильного натрия щавелевокислого, среду тщательно перемешивают и вносят 4 см 3 0,5 М стерильного раствора магния хлорида. Готовую среду разливают по чашкам Петри.
Определение индолообразования.
Испытуемую культуру выращивают в пробирке с бульоном Хоттингера. В пробирку с культурой вносят 2-3 капли эфира, тщательно ее встряхивают, оставляют в покое до отстаивания на поверхности среды слоя эфира. Осторожно добавляют
0,5 см 3 реактива Эрлиха, выдерживают 5 мин и учитывают результат. При наличии индолообразования слой эфира приобретает розово-красный цвет.
Для приготовления реактива Эрлиха в 95 см 3 96%-ного этанола растворяют 1 г парадиметиламинобензальдегида и добавляют 20 см 3 концентрированной хлористоводородной кислоты (НС1).
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.
Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки (витамины группы В, никотиновая кислота и др.).
Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.
В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их приготовления используют экономически рентабельное непищевое сырье: утратившие срок годности кровезаменители (гидролизин-кислотный гидролизат крови животных, аминопептид - ферментативный гидролизат крови; продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют относительно стандартный состав.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5-2% агара, полужидкие - 0,3- 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей, он плавится при температуре 80-86 °С, затвердевает при температуре около 40 °С и в застывшем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10-15%). Ряд естественных питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.
По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и дифференциально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду - питательный бульон и плотную - питательный агар. Такие среды служат основой для приготовления сложных питательных сред - сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от большинства других. Например, избирательный рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного вибриона - в щелочной среде и т. д.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов.
Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные среды . В состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Эти среды чаще всего применяют в научно-исследовательской работе и в микробиологической промышленности при получении антибиотиков, вакцин и других препаратов.
В последние годы в целях экономии питательных сред и ускоренной идентификации некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки, стрептококки и др.) применяются так называемые микротест-системы(МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды. Стерилизацию МТС проводят УФ-облучением. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.
Вопрос №9. Принципы и методы выделения чистых культур бактерий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий подразделяют по одному признаку на биологические варианты - биовары . Биовары, различающиеся по биохимическим свойствам, называют хемоварами , по антигенным свойствам - сероварами , по чувствительности к фагу - фаговарами . Культуры микроорганизмов одного и того же вида, или биовара, выделенные из различных источников или в разное время из одного и того же источника, называют штаммами , которые обычно обозначаются номерами или какими-либо символами. Чистые культуры бактерий в диагностических бактериологических лабораториях получают из изолированных колоний, пересевая их петлей в пробирки с твердыми или, реже, жидкими питательными средами.
Колония представляет собой видимое изолированное скопление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим признакам.
Чистую культуру бактерий получают для проведения диагностических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизма.
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по морфологии колоний и особенностям роста культуры.
Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определяют на дифференциально-диагностических средах.
При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и культуральную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент - Pseu-domonas aeruginosa.
Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят дополнительные исследования по выялвениб соответствующего маркера – определению фермента, антигена, чувствительности к Фанам.
Методы выделения чистых культур бактерий.
Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри - металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами над г писывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры).
Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.
Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах:
Бактерии, засеянные в определенный, но не изменяющийся объем жидкой питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что в дальнейшем приводит к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим, а культуру – периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура – непрерывной.
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузной или поверхностный (в виде пленки) рост культуры.
Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах:
Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.
Пигмент, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают ее, например синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) окрашивает среду в синий цвет. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. Так, колонии «чудесной палочки» имеют кроваво – красный пигмент, растворимый в спирте. И, наконец, существуют пигменты, нерастворимые ни в воде, ни в органических соединениях.
Вид, форму, цвет и другие особенности колоний на плотной питательной среде (культуральные свойства) учитывают при идентификации бактерий, а также отборе колоний для получения чистых культур.
В промышленных условиях при получении биомассы микроорганизмов с целью приготовления антибиотиков, вакцин, диагностических препаратов и эубиотиков культивирование в основном осуществляют в ферментерах при строгом соблюдении оптимальных параметров для роста и размножения культур.
Вопрос №10. Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение). Типы дыхания бактерий.
Дыхание, или биологическое окисление , основано на окислительно-восстановительных реакциях, идущих с образованием АТФ-универсального аккумулятора химической энергии. Энергия необходима микробной клетке для ее жизнедеятельности. При дыхании происходят процессы окисления и восстановления: окисление - отдача донорами (молекулами или атомами) водорода или электронов; восстановление - присоединение водорода или электронов к акцептору. Акцептором водорода или электронов может быть молекулярный кислород (такое дыхание называется аэробным) или нитрат, сульфат, фумарат (такое дыхание называется анаэробным - нитратным, сульфатным, фумаратным).
Анаэробиоз (от греч. аег - воздух + bios - жизнь) - жизнедеятельность, протекающая при отсутствии свободного кислорода. Если донорами и акцепторами водорода являются органические соединения, то такой процесс называется брожением . При брожении происходит ферментативное расщепление органических соединений, преимущественно углеводов, в анаэробных условиях. С учетом конечного продукта расщепления углеводов различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое и другие виды брожения.
По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три основные группы: облигатные, т.е. обязательные, аэробы, облигатные анаэробы и факультативные анаэробы.
Типы дыхания бактерий:
· Строгие аэробы. Функционируют в присутствие О 2
· Микроаэрофилы. Нуждаются в О 2 в меньшей степени.
· Факультативные анаэробы. Живут в присутствии О 2 и без негою могут дышать кислородными носителями: сульфаты, карбонаты.
· Облигатные анаэробы. Бактерии, которые бродят. Для них О 2 ядовит.
· Культура – микроорганизмы, выросшие на питательной среде.
· Колония – скопление микробных клеток.
· Чистая культура – микробы одного вида.
· Клон – генетически однородная популяция м/о, выделенная из одной микробной клетки при ее прямой изоляции.
· Штамм – чистая культура микробов выделенная из определенного источника в определенное время.
По назначению питательные среды подразделяют на следующие основные категории.
Универсальные - среды, на которых хорошо растут многие виды патогенных и непатогенных бактерий. К ним относятся: мясо-пептонный бульон (МПБ = мясная вода + 1% пептона + 0,5% NaCl), мясо-пептонный агар (МПА = МПБ + 2-3% агара).
Дифференциально-диагностические - среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям. К ним относятся среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса и многие др.
Селективные (синонимы: избирательные, элективные, обогатительные) - среды, содержащие вещества, используемые микроорганизмами определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других микроорганизмов. Селективные среды позволяют направленно отбирать из исследуемого материала определенные виды бактерий. Сюда относятся среды Мюллера, селенитовая, Рапопорт, 1%-ная пептонная вода и др.
Дифференциально-селективные - среды, сочетающие в себе свойства дифференциально-диагностических и селективных сред. Они используются, в частности, для ускорения обнаружения и идентификации бактерий, относящихся к большому числу широко распространенных видов энтеробактерий и псевдомонад (среды Сиволодского).
Специальные - среды, специально приготовленные для получения роста тех бактерий, которые не растут или очень плохо растут на универсальных средах. К ним относятся среды Мак-Коя-Чепина (для получения роста возбудителя туляремии), кровяной МПА (для получения роста патогенных стрептококков), среда Левенштейна-Иенсена (для выделения возбудителя туберкулеза) и др.
Синтетические - среды строго определенного химического состава, представляющие собой растворы неорганических солей с добавлением химических соединений, которые служат источником углерода или азота. Примером такой синтетической среды является минимальная среда М-9, в которой источником энергии и углерода является глюкоза, а азота - NH4C1. Синтетические среды могут быть и более сложного состава с включением различных аминокислот, оснований и витаминов.
Полусинтетические - синтетические среды, к которым добавляют какой-либо продукт природного происхождения, например сыворотку крови. Существует много различных вариантов питательных сред, сконструированных с учетом потребностей соответствующих видов бактерий и диагностических целей.
Асинхронный электродвигатель а4 предназначен для привода механизмов, которые не требуют регулировки частоты вращения (вентиляторов, дымососов, насосов). Отличительные особенности двигателей серии А4 и их характеристики вы можете узнать на